96孔板 大肠杆菌蛋白提取实验
大肠杆菌蛋白的表达涉及到蛋白的可溶性,对于疏水性蛋白来说后期处理比较麻烦,因为蛋白过完Ni柱之后涉及到咪唑的处理,现在传统的工艺就是透析或者加疏水柱,但是透析容易出现蛋白凝集,产生大量沉淀,损失量高,导致目标蛋白的产量降低,蛋白活性低,耗时时间长;而加疏水柱后期洗脱会加入大量的氯化钠,高盐对于后期实验有影响,所以这两种方法对于有些疏水性强的蛋白来说很不合适。更重要的是,目前均采用单标签的方式,而像GST标签等均为蛋白类物质,因此体系中同时会存在相应标签的游离的杂蛋白,导致除去困难或无法除去等,致使蛋白质纯度降低,且后处理工艺复杂。
此外,对于大肠杆菌破碎而言,传统的大肠杆菌破碎工艺为超声破碎和高压匀浆;高压匀浆仪价格昂贵,而且仪器出故障的概率高,维修费用高。超声破碎的方法缺点很多,比如由于超声会产生持续的热量,这样会降低蛋白的活性,还破坏蛋白的结构,造成蛋白量的损失。还有就是超声破碎对体积有要求,体积不能过大,体积过大,超声时间越长,产生的热量也会增加,对蛋白影响会更严重,
非接触超声打断仪,适合处理高通量样品,同时低温控制超声热量对样品的影响,消除了样品交叉污染的危险;能隔着离心管能打断染色体、破碎细胞。
研究方向:
96孔板 大肠杆菌蛋白提取实验
实验步骤:
1、准备96孔PCR板预制好大肠杆菌密封;
2、超声总时间30min,超30s,停10s
3,显微镜镜检破碎效果 如图
实验解决的问题:
1、仪器多通道相对于手工单通道超声工作时更省力方便,实验更安全;
2、控温制冷对样品保护好,提取出的成分在数量和质量上比手工超声均质效果更好;
3、不会出现交叉感染,实验更省心
破碎前大肠杆菌
破碎后
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